合酶链响应老师执行室是指通过基因扩增的模式检测特定的DNA或RNA的老师执行室。团员酶链响应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是一种在体外特异性扩增靶DNA序列的本领，其基本过程为模板双链DNA的变性、引物与模板DNA的退火和在DNA团员酶指挥下的链蔓延响应三个阶段的屡次轮回。每一次轮回后的扩增产物均可当作下一轮轮回的模板，表面上，扩增产物量呈指数状貌高潮，即经过n个轮回后，产物量加多到2n倍，短时辰内在体外可取得数百万个特异靶DNA序列的复制，为瞻望、可贵、会诊、调理监测、预后不雅察和健康现象评价提供了一种极有匡助的执行室援助技巧。

PCR老师执行室是PCR试剂分娩企业在居品老师过程中不可贫寒的责任环境，其环境戒指水暄和质地惩办水平径直影响着最终居品老师恶果的准确性。由于该居品自身的稀零性，《医疗器械分娩质地惩办圭表附录体外会诊试剂》、《医疗器械分娩质地惩办圭表体外会诊试剂现场检讨率领原则》条件中，对PCR试剂的分娩和老师环境作念出明确章程。此外现行卫生行业的法律评释、圭臬以及联系文献中对于PCR老师执行室均作出章程，主要触及《世界临床老师操作规程》（第4版）、《医疗机构临床基因扩增老师执行室惩办目的》（卫办医政发〔2010〕194号）以及《及时荧光团员酶链响应临床执行室 哄骗指南》（WS/T 230-2024）等行业圭臬的联系要求。

本检讨指南旨在匡助北京市医疗器械监管东说念主员增强对PCR老师联系过程的剖判和主理，率领全市医疗器械监管东说念主员对PCR老师执行室筹算培植与质地戒指的监督检讨责任。同期，为PCR试剂分娩企业在PCR老师执行室的筹算建造和惩办要求提供参考。

本指南中触及或援用的国度联系法律、法律评释、依次、圭臬、检讨指南等发生内欢跃效劳变化时，要以其时扩充的最新版为准。必要时，北京市药品监督惩办局应从头计议矫正，以确保本指南连接相宜要求。

本检讨指南可当作北京市药品监督惩办局组织、实施的体外会诊试剂居品注册质地惩办体系现场核查、医疗器械分娩许可现场核查、医疗器械分娩监督检讨等触及PCR老师执行室检讨的参考尊府。

基因测序老师执行室等触及PCR试剂的联系部分应当参照本检讨指南扩充。

（一）PCR老师执行室布局

分娩企业应当提供PCR老师执行室筹算决策和/或平面筹算图（应当表明风向或压差梯度）。

1.PCR老师执行室与PCR试剂分娩区域应当在各自独处的建筑物或空间内，保证空气不径直连通，小心扩增时形成的气溶胶变成交叉浑浊。

2.原则上PCR老师执行室应当成立以下区域：试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。阐述使用仪器的功能，区域可得当归并。若使用及时荧光定量PCR仪且不需要进行后续产物分析责任，扩增区、扩增产物分析区可归并。若使用样本处理、核酸提真金不怕火及扩增检测为一体的自动化分析仪，则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可归并。归并的区域需聘用相应生物安全防护和幸免环境浑浊的措施。

3.各区域在物理空间上应当完满相互独处，各区域不管是在空间上一经在使用中，应当耐久处于完满的分隔现象。不应当仅仅状貌上的分区，不应当是一个区域嵌套一个区域。

4.各区域不应当有空气的径直连通。扩增区与扩增产物分析区各区域宜给与独处直排模式出风。给与空调机组模式的，PCR老师执行室应当具备独处空调机组；同期应当洽商停机后各房间空气连通的可能性，聘用必要的戒指措施。

5.按照试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区标的空气压力应当以递减的模式进行，使得PCR老师执行室的空气流向应当按照试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区标的进行，小心扩增产物顺空气气流参预扩增前的区域。空气流向应当为单向，不容下流浑浊上游。应当成立合理的压差梯度，并安装压差监测安设，以灵考据明空气流向，压差梯度不宜低于5帕。PCR老师执行室培植可参考附件进行筹算。

6.成立缓冲间的，缓冲间内通向执行室和走廊的门应当安装互锁安设或聘用相应措施，幸免出现两个门同期绽开的情况。

7.各区间若成立传递窗，应当为双侧开门，要求密封严密，况且两侧的门应当为互锁安设或聘用相应措施确保双方门不会同期开启。

（二）仪器设施确立

1.试剂储存和准备区的功能：储存试剂的制备、试剂的分装和扩增响应搀杂液的准备，以及离心管、吸头等浪掷品的储存和准备。配套用品一般应当包括：

（1）相宜储存温度要求的雪柜；

（2）混匀器；

（3）离神思；

（4）水浴箱或加热模块；

（5）微量加样器；

（6）紫外消毒开采；

（7）浪掷品：一次性手套、一次性口罩、一次性帽子、耐高压处理和（或）一次性的离心管和加样器吸头；

（8）专用责任服和责任鞋（套）。

2.标本制备区的功能：核酸（RNA、DNA）提真金不怕火、储存及加样。配套用品一般应当包括：

（1）相宜储存温度要求的雪柜；

（2）离神思；

（3）混匀器；

（4）水浴箱或加热模块；

（5）微量加样器；

（6）紫外消毒开采；

（7）生物安全柜；

（8）核酸提真金不怕火开采；

（9）浪掷品：一次性手套、一次性口罩、一次性帽子、耐高压处理和（或）一次性的离心管和加样器吸头（带滤芯）；

（10）专用责任服和责任鞋（套）；

（11）如需处理大分子DNA，应当具有超声波开采。

3.扩增区的功能：cDNA合成、DNA扩增及检测。配套用品一般应当包括：

（1）核酸扩增开采；

（2）微量加样器；

（3）离神思；

（4）紫外消毒开采；

（5）浪掷品：一次性手套、一次性口罩、一次性帽子、耐高压处理和（或）一次性的离心管和加样器吸头（带滤芯）；

（6）专用责任服和责任鞋（套）。

4.扩增产物分析区的功能：扩增片断的进一步分析测定。视老师方法不同而定，基本确立如下：

（1）分析开采；

（2）微量加样器；

（3）紫外消毒开采；

（4）相宜储存温度要求的雪柜；

（5）浪掷品：一次性手套、一次性口罩、一次性帽子、加样器吸头（带滤芯）；

（6）专用责任服和责任鞋（套）。

上述各区域仪器开采为一般确立，执行室应当阐述使用的扩增检测本领或试剂的脾气，对仪器开采进行必要的增减。

5.开采的吝惜保重

应当建立开采吝惜保重规程，计量开采应当如期检定或校准。举例核酸扩增开采、微量加样器等应当每年进行检定或校准责任。

（三）责任经由及肃肃事项

1.单次执行参预各责任区域应当严格按照单一标的进行，即试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区。

2.各责任区域必须有明确的标记，不同责任区域内的开采、物品不得混用。

3.不同责任区域的责任服应当加以永诀，不得混用（举例不错给与不同状貌）。

4.执行室的清洁应当按照试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区的标的进行。不同的执行区域应当有其各自的清洁器具并小心交叉浑浊。执行垃圾属于医疗废料的应当按照《医疗废料惩办条例》联系章程进行处理。

5.责任兑现后，应当立即对责任区进行清洁及消毒。

6.储存试剂和用于标本制备的浪掷品等材料应当径直运载至试剂储存和准备区，不行经过扩增区及扩增产物分析区。应当对加样吸头、PCR响应管等浪掷品进行防护，小心被浑浊。使用的试剂和耗材不应当对居品老师变成干与。

7.加入待测核酸时，应聘用相应的措施幸免样本间的交叉浑浊。对具有潜在传染危急性的材料，应当在生物安全柜内开盖，并有明确的样本处理和灭活法子。

8.如需对扩增产物进行开盖处理的，应当聘用相应的措施幸免气溶胶所致的浑浊。

9.扩增产物分析区如存在溴化乙锭、丙烯酰胺、甲醛或辐射性核素等有毒无益物资，应当肃肃执行东说念主员的安全防护，必要时配备透风橱等防护开采。

（四）东说念主员培训情况

参与PCR老师的责任主说念主员应当具备相应的专科学问和技能，包括能练习操作联系开采，明确所有这个词责任的经由，掌持出现浑浊情况的处理方法以及执行室质地戒指方法和检测恶果的评释。

检讨东说念主员不错通过商量或要求东说念主员本色操作对其进行评价，也不错通过查阅东说念主员培训纪录，对其进行评价。

（五）文献惩办情况

连合本色建立对PCR老师执行室的质地惩办体系文献，制定联系程小序件、操作规程等，并保留相应纪录。联系质地惩办体系文献包括但不限于执行室惩办轨制、东说念主员惩办轨制、样本惩办轨制、执行室防护惩办轨制、烧毁物惩办轨制等，以及联系设施开采启动与吝惜操作规程、老师规程等。

在检讨过程中应当特别肃肃现场稽查、商量、纪录的本色情况与分娩企业的文献章程、纪录的相宜性。

附件1：

理念念的PCR老师执行室筹算

图A 缓冲间为负压的理念念PCR老师执行室成立模式

图B 缓冲间为正压的理念念PCR老师执行室成立模式

图A和图B所给出的PCR老师执行室成立图是较为理念念的成立模式，提倡企业参照此种模式筹算并建立执行室。

附件2

参考尊府

1.《对于发布医疗器械分娩质地惩办圭表的公告》（国度食物药品监督惩办总局公告2014年第64号）

2.《对于发布医疗器械分娩质地惩办圭表附录体外会诊试剂的公告》（国度食物药品监督惩办总局公告2015年第103号）

3.《对于印发医疗器械分娩质地惩办圭表现场检讨率领原则等4个率领原则的见告》（食药监械监〔2015〕218号）

4.世界临床老师操作规程（第4版）

5.《医疗机构临床基因扩增老师执行室惩办目的》（卫办医政发〔2010〕194号）

6.《及时荧光团员酶链响应 临 床 实 验 室哄骗指南》（WS/T 230-2024）

7.《生物安全执行室建筑本领圭表》（GB 50346-2011）

8.《执行室生物安全通用要求》（GB 19489-2008）